噬菌體篩選是一項強大的生物技術(shù)，在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用，為新藥研發(fā)、疾病診斷和治療等提供了有力的工具。
 

　　1.構(gòu)建噬菌體文庫：將感興趣的蛋白質(zhì)或多肽等外源基因片段插入到噬菌體的基因組中，使這些分子能夠展示在噬菌體的表面，形成噬菌體展示庫。例如，把目標抗原相關(guān)的抗體成分整合進噬菌體里，構(gòu)建出噬菌體抗體庫。
 

　　2.選擇性結(jié)合：把構(gòu)建好的噬菌體文庫與特定的配體相接觸。此時，只有那些表面展示的分子能與目標配體發(fā)生特異性結(jié)合的噬菌體才會被保留下來。這一過程利用了分子間的識別特性，確保只有具備相應(yīng)功能的噬菌體進入下一步。
 

　　3.富集與擴增：經(jīng)過初步篩選后，對保留下來的噬菌體進行感染宿主細胞(如大腸桿菌)，使其大量復(fù)制和擴增。然后重復(fù)“吸附—洗脫—擴增”的循環(huán)步驟，經(jīng)過多輪這樣的操作，逐步提高可以特異性識別靶分子的噬菌體比例，獲得能夠識別靶分子的多肽或者蛋白。
 

　　噬菌體篩選中的注意事項：
 

　　1.試驗材料要求
 

　　-試驗菌純度：必須是純培養(yǎng)物，如遇裂解模式不規(guī)則，應(yīng)將菌株重新分純后再作試驗。
 

　　-平板烘干程度：平板必須烘干適度，烘干不足時滴加噬菌體會相互融合，烘干過度時裂解反應(yīng)不易出現(xiàn)。
 

　　-菌液濃度適宜：菌液要達到大約10 cfu/mL的濃度，否則陽性裂解率將降低。
 

　　2.操作規(guī)范
 

　　-準確滴加與記錄：滴加噬菌體的位置切勿搞錯，記錄結(jié)果應(yīng)與所滴加的噬菌體一致。
 

　　-防止交叉污染：嚴格防止噬菌體交叉污染，一旦發(fā)生交叉污染，哪怕只有十萬分之一的量，已足夠使全部結(jié)果發(fā)生錯亂。
 

　　-保存條件控制：夏秋季天氣炎熱時，診斷噬菌體不可長時間放在室溫中，應(yīng)待滴加噬菌體時才從冰箱中取出使用，用后立即放回冰箱保存。
 

　　-避免污染失效：噬菌體液易生長細菌，必須嚴格防止污染，已混濁者不可使用。
 

　　-忌用灼熱接種環(huán)挑取：切忌用灼熱的接種環(huán)挑取噬菌體液，以防效價迅速下降。
 

　　3.篩選過程中的其他要點
 

　　-保持細胞活性與抗原完整性：篩選過程中需保持細胞活性(如使用含Ca/Mg的緩沖液)，避免抗原構(gòu)象破壞，可通過臺盼藍染色或ATP檢測評估細胞狀態(tài)。
 

　　-設(shè)置陰性對照：每輪篩選必須包含野生型細胞作為陰性對照，用于排除非特異性結(jié)合的噬菌體。
 

　　-保護文庫多樣性：擴增時控制感染復(fù)數(shù)(MOI < 1)，避免優(yōu)勢克隆過度擴增導(dǎo)致文庫多樣性丟失。