展示在噬菌體表面的隨機(jī)肽庫可應(yīng)用于許多方面，包括繪制抗原表位圖譜、研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用和鑒定非肽配體的肽模擬型。生物活性肽分子的鑒定可以通過對固定在平板上的純化受體進(jìn)行淘選，也可以在完整細(xì)胞上進(jìn)行淘選。蛋白酶底物的鑒定可通過在隨機(jī)肽區(qū)域的上游加一段親和tag，然后選用特異性的介質(zhì)來區(qū)分切割和未切割的噬菌體。另外大的蛋白質(zhì)分子如：抗體、激素、蛋白酶抑制劑、酶和結(jié)合蛋白也可展示在噬菌體上，通過對隨機(jī)突變文庫的
噬菌體篩選，分離出各種具有親和力或特異性改變的變異株。
只有當(dāng)噬菌體的感染復(fù)度MOI值遠(yuǎn)低于1時(shí)（即細(xì)胞過量時(shí)），噬菌斑的數(shù)量才會(huì)隨著加入噬菌體的量而呈線性增加。正因如此，建議檢測噬菌體貯液的滴度時(shí)，在感染前進(jìn)行稀釋，而不是在高M(jìn)OI值的情況下稀釋被感染的細(xì)胞。低MOI值有助于確保每個(gè)噬菌斑僅含一個(gè)DNA序列。
1.接種單菌落于5-10 ml LB培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)至對數(shù)中期。
2.細(xì)胞生長時(shí)，微波爐融化上層瓊脂，分成3 ml等份于滅菌試管中，每個(gè)噬菌體稀釋度一管。保存于45℃?zhèn)溆谩?/div>
3.37℃預(yù)溫平板，每個(gè)噬菌體稀釋度取一個(gè)平板備用。
4.在LB中準(zhǔn)備10倍系列稀釋的噬菌體。
建議稀釋范圍擴(kuò)增的噬菌體培養(yǎng)物上清10-10；未擴(kuò)增的淘選洗脫物10-10。每個(gè)稀釋度換一新鮮吸頭，建議使用帶濾芯吸頭以避免交叉污染。
5.當(dāng)菌體培養(yǎng)物達(dá)對數(shù)中期，分成200μl等份于微量離心管中，每個(gè)噬菌體稀釋度一管。
6.每管加入10μl不同稀釋度的噬菌體，快速震蕩混勻，室溫溫育1-5 min。
7.將感染細(xì)胞加入45℃預(yù)溫的上層瓊脂培養(yǎng)管中，每次一管，快速混勻，立即傾注于37℃預(yù)溫的平板上。適當(dāng)傾斜平板將上層瓊脂均勻鋪開。
8.待平板冷卻5 min后，倒置于37℃培養(yǎng)過夜。
9.檢查平板，計(jì)數(shù)有~10個(gè)噬菌斑的平板上的斑數(shù)。然后用此數(shù)目乘以稀釋因子即得到每10μl噬菌體的空斑形成單位（pfu）滴度。
3359689365@qq.com
010-56256916
更新時(shí)間：2020-12-09
點(diǎn)擊次數(shù)：2183
快速導(dǎo)航：
產(chǎn)品中心：
公司地址
關(guān)注公眾號
當(dāng)前位置：